植物组织培养时,外植体消毒的方法和消毒剂 - 处理中暑

TUhjnbcbe - 2021/7/5 20:22:00

外植体的消*

外植体消*的方法

1.常用的消*剂

理想的消*剂应具有消*效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。

（1）酒精

酒精是最常用的表面消*剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好（浙科版教材用70%），95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。

酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消*剂的渗入。但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间（浙科版教材为10min）。但酒精不能彻底消*，一般不单独使用，多与其他消*剂配合使用。

（2）升汞（人教版）

又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。升汞的消*效果极佳，但易在植物材料上残留，消*后需用无菌水反复多次冲洗。升汞对环境危害大，对人畜的*性极强，使用后应做好回收工作。

（3）次氯酸钠（浙科版）

次氯酸钠是一种较好的消*剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。其消*能力很强，不易残留，对环境无害。但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。

（4）漂白粉

漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消*效果很好，对环境无害。它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。

（5）过氧化氢

也称双氧水，消*效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消*。

（6）新洁尔灭

这是一种广普表面活性消*剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。

2.消*方法

（1）茎尖、茎段及叶片等的消*

消*前先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，然后用自来水冲洗。对于一些表面不光滑或长有绒毛的材料，可用洗涤剂清洗，必要时用毛刷充分刷洗，硬质材料可用刀刮。

消*时在超净台上操作，先用70%酒精浸泡10~30s，以无菌水冲洗2~3次，然后按材料的老、嫩和枝条的坚实程度，分别采用2%次氯酸钠浸泡10~15min或用0.1%升汞浸5~10min。消*时要不断搅动，使植物材料与消*剂充分地接触。

（2）果实及种子的消*

先用自来水冲洗10~20min，再用酒精迅速漂洗一下。果实用2%次氯酸钠浸10min，后用无菌水冲洗2~3次。种子则先用10%次氯酸钠浸泡20~30min，难以消*的可用0.1%升汞消*5~10min。对于种皮太硬的种子，也可预先去掉种皮，再用4%次氯酸钠浸泡8~10min。

（3）花药的消*

用于组织培养的花药多未成熟，其外面有花萼、花瓣或颖片保护，处于无菌状态。消*时将整个花蕾或幼穗用70%酒精浸泡数秒钟，然后用无菌水冲洗2~3次，再在漂白粉中浸泡10min，最后用无菌水冲洗2~3次。

（4）根及地下部器官的消*

由于这类材料生长于土壤中，表面带菌量大，消*较为困难。可先用自来水冲洗，软毛刷刷洗，用刀切去损伤及污染严重部位，再用酒精漂洗后，置于0.1%升汞中浸5~10min或2%次氯酸钠中浸10~15min，最后用无菌水冲洗3次。

在操作时要根据材料的大小、幼嫩、质地等差异做出判断后，再选择适宜的消*剂种类、浓度和消*时间，切不可生搬硬套。消*的最佳效果应以最大限度地杀死材料上的微生物，而又对材料的损伤最小为好。

提出问题：

外植体的消*处理是植物组织培养工作中的重要一环，植物组织培养时的外植体如何消*？

植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。因此在材料接种培养前必须要消*处理，消*一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。

浙科版选修1教材第61页

典型试题解析

试题：(·10月浙江选考节选)科研人员拟将已知的花色基因(目的基因)转入矮牵牛的核基因组中，培育新花色的矮牵牛。请回答：

(1)取田间矮牵牛的幼嫩叶片，经自来水冲洗，先用70%浸泡，再用5%次氯酸钠浸泡，最后用清洗，作为转基因的受体材料。

(2)取出试管苗，在适宜的光照、温度和80%以上的等条件下进行炼苗。

解析：

(1)用作组培的外植体若取自自然环境则需要消*，方法是外植体经自来水冲洗，先用70%酒精浸泡，再用5%次氯酸钠浸泡，最后用无菌水清洗，才能用于接种。

(2)组培时，试管苗需经炼苗才能定植，炼苗时需将试管苗从培养瓶中取出，移栽至具适宜的光照、温度和较低湿度的环境中。

答案：（1）酒精　无菌水　（2）湿度